Bisfosfoniany są szeroko stosowane jako środki przeciwresorpcyjne do leczenia różnych chorób kości i stawów, w tym zaawansowanej osteoporozy, szpiczaka mnogiego, nowotworów z przerzutami do kości, choroby Pageta kości i reumatoidalnego zapalenia stawów. Bisfosfoniany działają jako antyosteoklasty poprzez indukcję apoptozy osteoklastów, co powoduje zmniejszenie tempa resorpcji kości. Niestety, istnieje wiele dowodów na to, że długotrwałe stosowanie bisfosfonianów wiąże się z martwicą kości.

Patogeneza martwicy kości obejmuje śmierć osteoblastów, osteoklastów i osteocytów. Ponadto funkcje komórek śródbłonka, komórek nabłonkowych i fibroblastów są upośledzone w martwicy kości, co prowadzi do zaburzającej angiogenezy i opóźnionego gojenia się ran. Martwica kości jest najczęściej stwierdzana w kości szczęki, a określenie związanej z lekami martwicy kości szczęki (MRONJ) stało się stanem o największym znaczeniu klinicznym wśród pacjentów otrzymujących bisfosfoniany. Chociaż leczenie chirurgiczne jest skuteczną strategią leczenia MRONJ, zbadano również kilka niechirurgicznych interwencji mających na celu osłabienie MRONJ.

Mając na celu pogłębienie wiedzy na temat MRONJ, postanowiliśmy podsumować i omówić holistyczny wpływ bisfosfonianów na kość i otaczające ją tkanki.

Ponadto omówiono i omówiono niechirurgiczne interwencje mające na celu osłabienie martwicy kości wywołanej bisfosfonianami.

• Jednym z powikłań endoskopowego rozwarstwienia podśluzówkowego przełyku (ESD) jest pooperacyjne tworzenie się zwężenia. Powstawanie zwężenia jest związane ze stanem zapalnym i zwłóknieniem w procesie gojenia.
• Postawiliśmy hipotezę, że stopień uszkodzeń termicznych spowodowanych przez urządzenie jest związany z powstawaniem zwężeń.
• Naszym celem było ujawnienie związku między uszkodzeniem termicznym a wartością nastawczą urządzenia. Po resekcji przełyku świńskiego podaliśmy energię za pomocą urządzenia ESD (Flush Knife 1.5). Wykonaliśmy 10 punktów zasilania przez 1 s, 3 s i 5 s przy czterech nastawach urządzenia.
• Zmierzyliśmy ilość prądu płynącego do przewodzących punktów oraz temperaturę i oceniliśmy patologicznie skutki uszkodzeń termicznych. W rezultacie średnie najwyższe temperatury przez 1 s to I (SWIFT Efekt3, Wat20): 61,19°C, II (SWIFT Efekt3, Wat30): 77,28 °C, III (SWIFT Efekt4 Wat20): 94,50 °C i IV (SWIFT Efekt4 Wat30) ): 94,29°C.
• Średnie pola denaturacji cieplnej wynosiły I: 0,84 mm ² , II: 1,00 mm ² , III: 1,91 mm ² , IV: 1,54 mm ² . Średnia najwyższa temperatura i średnia powierzchnia denaturacji cieplnej były istotnie skorelowane (P < 0,001). Podsumowując, niskoprądowe wyładowania elektrostatyczne mogą tłumić rzeczywistą temperaturę i uszkodzenia termiczne w ranie ESD.
• Sarkoidoza jest wieloukładową, zapalną chorobą ziarniniakową, która rzadko obejmuje tkankę piersi. Patofizjologia tej przewlekłej choroby ziarniniakowej nie jest dobrze poznana, ale uważa się, że jest wieloczynnikowa, obejmująca wpływy środowiskowe powodujące wzmocnioną odpowiedź immunologiczną.
• Kluczową cechą histomorfologiczną w sarkoidozie jest obecność niemartwiczych ziarniniaków. W tym przypadku opisujemy 41-letniego Afroamerykanina ze znaną historią sarkoidozy płuc, u którego wystąpiła ginekomastia i obustronna tkliwość piersi z wyczuwalnymi guzkami.
• W dalszej biopsji i badaniu mikroskopowym guzków piersi stwierdzono rozlane zajęcie ziarniniaków niemartwiczych w obu piersiach. Ostateczną diagnozę rozległej sarkoidozy obejmującej tkankę piersi postawiono po wykluczeniu innych przyczyn ziarniniaków niemartwiczych.
• Pacjentka przeszła obustronną mastektomię w celu usunięcia guzków piersi. Ten przypadek omawia sarkoidozę z nietypowym miejscem. Enteroidy pochodzące z ludzkiej tkanki jelitowej (HIE; zwane również organoidami) są potężnym modelem ex vivo do badań żołądkowo-jelitowych.

Modyfikacja genetyczna tych nieprzekształconych kultur umożliwia nowy wgląd w funkcje genów i procesy biologiczne związane z chorobami jelit, a także funkcje specyficzne dla przewodu pokarmowego i segmentu dawcy.

W tym miejscu przedstawiamy szczegółowy rurociąg techniczny i protokół wykorzystania systemu edycji genomu CRISPR-Cas9 do wyłączenia interesującego genu w szczególności w HIE poprzez transdukcję lentiwirusową i klonowanie pojedynczych komórek. Protokół ten różni się od wcześniej opublikowanej alternatywy wykorzystującej elektroporację ludzkich kolonioidów do dostarczania transpozonów typu „piggyback” lub konstruktów CRISPR-Cas9, ponieważ protokół ten wykorzystuje zmodyfikowany, zfuzowany mały kierujący RNA LentiCRISPRv2 do ekspresji Cas9 i małego kierującego RNA w lentiwirusie.

 

Protokół obejmuje również etapy dostarczania genów i późniejsze klonowanie pojedynczych komórek komórek z nokautem, jak również weryfikację klonów i identyfikację sekwencji miejsc mutacji w celu ustanowienia klonów z nokautem.Przedstawiono ogólny schemat blokowy, wskazówki krok po kroku i sugestie dotyczące rozwiązywania problemów, aby pomóc badaczowi w uzyskaniu genetycznej linii HIE z nokautem w ciągu 2-3 miesięcy. W tym protokole dalej opisujemy, jak stosować HIE jako model ex vivo do oceny czynników restrykcyjnych gospodarza dla replikacji wirusa (na przykładzie replikacji ludzkiego norowirusa) przez nokautowanie czynników przyłączania gospodarza lub genów odporności wrodzonej. Omówiono inne zastosowania w celu poszerzenia użyteczności tego systemu, na przykład do generowania linii typu knockin lub warunkowego knockout HIE w celu zbadania funkcji niezbędnych genów w wielu procesach biologicznych, w tym w innych typach organoidów.

Inżynieria tkankowa in situ (TE) to podejście, które wykorzystuje bioresorbowalne przeszczepy w celu wywołania endogennej regeneracji uszkodzonych naczyń krwionośnych. Ocena nowo opracowanych przeszczepów naczyniowych TE in situ w dużej mierze opiera się na doświadczeniach na zwierzętach. Nie zdefiniowano jednak żadnego standardu dla modeli in vivo ani projektu badania, co utrudnia porównania między badaniami i wydajność translacji.

Aby dostarczyć danych wejściowych do sformułowania takiego standardu, celem tego badania było zmapowanie wszystkich doświadczeń na zwierzętach pod kątem TE naczyniowych in situ przy użyciu dostępnych z półki, resorbowalnych syntetycznych przeszczepów naczyniowych. Przeszukanie literatury (PubMed, Embase) dało 15 896 badań, z których 182 badania spełniały kryteria włączenia (n = 5101 zwierząt). Raporty przedstawiały szeroką gamę projektów badań, modeli zwierzęcych i biomateriałów. Metaanaliza drożności przeszczepu z analizą podgrup pod kątem gatunku, wieku, płci, miejsca implantacji i czasu obserwacji wykazała różnice specyficzne dla modelu. Badanie to identyfikuje możliwości ulepszonego projektowania i raportowania doświadczeń na zwierzętach w celu zwiększenia wartości translacyjnej.

Wpływ układu odpornościowego i stanu zapalnego na homeostazę narządów i nisze komórek macierzystych tkanek przy braku inwazji patogenów od dawna stanowi zagadkę w dziedzinie medycyny regeneracyjnej.

Paradoksalna rola składników immunologicznych w promowaniu uszkodzenia tkanek, a także rozwiązywaniu uszkodzeń tkanek, komplikuje terapeutyczne ukierunkowanie zapalenia jako środka do osiągnięcia homeostazy tkanek w kontekście choroby zwyrodnieniowej. Problem ten można rozwiązać za pomocą zintegrowanej, złożonej oceny zależności między komponentami zapalnymi a czynnikami mikro- i makrośrodowiskowymi występującymi w tkankach podczas zdrowia i choroby.

Rozważne decyzje dotyczące losu komórek macierzystych i ich zróżnicowanego potomstwa mają kluczowe znaczenie dla zachowania integralności i funkcji tkanek. Komórki macierzyste muszą dokonać tego wyboru losu w porozumieniu z innymi składnikami tkanki. Pod tym względem tkankowe komponenty odpornościowe, cząsteczki wykrywające niebezpieczeństwo/uszkodzenie kierujące sterylnymi kaskadami sygnalizacji zapalnej i komórki barierowe pełniące funkcje nadzoru immunologicznego odgrywają kluczową rolę w nadzorowaniu decyzji komórek macierzystych w ich niszach. Komórki macierzyste uczą się na podstawie wcześniejszych uszkodzeń, zarówno endogennych, jak i egzogennych, albo dostosowują się do trwałych zmian mikrośrodowiskowych, aby koordynować swoje decyzje.

Zatem zrozumienie sieci komunikacyjnych między komórkami macierzystymi a elementami układu odpornościowego jest niezbędne do zrozumienia decyzji podejmowanych przez komórki macierzyste w endogennych niszach tkankowych. Ponadto interakcje ogólnoustrojowe między niszami tkankowymi zintegrowanymi przez sieci odpornościowe służą jako systemy patrolujące do ustanawiania połączeń komunikacyjnych i organizowania ekologii mikroimmunologicznych w celu lepszej odpowiedzi organizmu na urazy i promowania regeneracji. Zrozumienie tych połączeń komunikacyjnych jest kluczem do opracowania immunocentrycznych terapii regeneracyjnych.

Tissue-Tek
abx082403-118ml	Abbexa	118 ml	276 EUR
Tissue Culture Plate, 12 Well
TCP20-12	Bio Basic	1 UNIT	64.18 EUR
Biopsy Coredish 12 Compartmen Empty
CON8150	Scientific Laboratory Supplies	PK10	88.92 EUR
Gastroscope biopsy (ESD) tissue array
ST245	TissueArray	each	114 EUR
Biopsy Coredish Lower GI Tract 12 Compartment Empty
CON8152	Scientific Laboratory Supplies	PK10	88.92 EUR
99445-12 DCT 12 X 75MM
99445-12	CORNING	250/pk	80.4 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Benign)
12-303-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Benign)
12-303-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Abnormal)
12-305-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Abnormal)
12-305-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Individual Reaction Mix 12
G065-12	ABM	200 reactions	200.4 EUR
Cryobox for biopsy vial
DD64052	Scientific Laboratory Supplies	PK12	156.18 EUR
Human 12-lipoxygenase,LOX-12 ELISA Kit
201-12-0949	SunredBio	96 tests	528 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Undiagnosed)
12-310-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Undiagnosed)
12-310-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Normal)
12-311-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Normal)
12-311-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Benign)
12-313-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Benign)
12-313-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Lipoma)
12-314-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Lipoma)
12-314-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Liposarcoma)
12-316-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Liposarcoma)
12-316-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Abnormal)
12-317-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Adipose-Abnormal)
12-317-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Matched Pair Tissue Slides - Bladder Tissue
12-600-MPPT	ProSci	1 pack	241.8 EUR
Matched Pair Tissue Slides - Skin Tissue
12-700-MPPT	ProSci	1 pack	241.8 EUR
Breast Tissue Lysate (Normal)
1710-12	ProSci	0.1 mg	260.7 EUR
Colon Tissue Lysate (Normal)
1715-12	ProSci	0.1 mg	260.7 EUR
Human Interleukin 12,IL-12/P70 ELISA KIT
201-12-0100	SunredBio	96 tests	528 EUR
Human Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA KIT
201-12-0101	SunredBio	96 tests	528 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Skeletal Muscle-Normal)
12-341-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Skeletal Muscle-Normal)
12-341-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Skeletal Muscle-Benign)
12-343-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Skeletal Muscle-Benign)
12-343-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Skeletal Muscle-malignant)
12-345-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Soft Tissue Tissue Slide (Skeletal Muscle-malignant)
12-345-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
TEK Antibody
1-CSB-PA041300	Cusabio	380.40 EUR 292.80 EUR	100ul 50ul
TEK Antibody
1-CSB-PA050236	Cusabio	266.40 EUR 234.00 EUR	100ug 50ug
TEK Antibody
1-CSB-PA050237	Cusabio	266.40 EUR 234.00 EUR	100ug 50ug
TEK Antibody
1-CSB-PA982820	Cusabio	380.40 EUR 292.80 EUR	100ul 50ul
TEK siRNA
20-abx936459	Abbexa	661.20 EUR 878.40 EUR	15 nmol 30 nmol
TEK Antibody
1-CSB-PA023375GA01HU	Cusabio	716.40 EUR 399.60 EUR	150ul 50ul
TEK antibody
70R-20759	Fitzgerald	50 ul	522 EUR
TEK Antibody
37274-100ul	SAB	100ul	302.4 EUR
anti-TEK
YF-PA27377	Abfrontier	50 ug	435.6 EUR
Aligned Nanofibers 12 Well Plate Inserts
3D00016-12	Neuromics	700 nm-PCLs	127.2 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette White
HIS0032	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	190.38 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette Pink
HIS0033	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	190.38 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette Green
HIS0034	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	190.38 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette Yellow
HIS0035	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	190.38 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette Blue
HIS0036	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	190.38 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette White
HIS0076	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	326.04 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette Pink
HIS0077	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	326.04 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette Green
HIS0078	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	326.04 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette Yellow
HIS0079	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	326.04 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette Blue
HIS0080	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	326.04 EUR
Simport Swingsette Biopsy Cassette White
HIS2000	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	313.5 EUR
Simport Swingsette Biopsy Cassette Pink
HIS2002	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	313.5 EUR
Simport Swingsette Biopsy Cassette Green
HIS2004	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	313.5 EUR
Simport Swingsette Biopsy Cassette Yellow
HIS2006	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	313.5 EUR
Biopsy Coredish 5 Compartment Empty
CON8156	Scientific Laboratory Supplies	PK10	88.92 EUR
Biopsy Coredish 8 Compartment Empty
CON8160	Scientific Laboratory Supplies	PK10	88.92 EUR
TISSUE CULTURE PLATE 12-WELL 6.80ML
ARG1486	Scientific Laboratory Supplies	PK100	319.2 EUR
Human cysteinyl aspartate specific proteinases 12,Caspase-12 ELISA Kit
201-12-0763	SunredBio	96 tests	528 EUR
Penis Tissue Slide (Malignant)
12-204-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Penis Tissue Slide (Malignant)
12-204-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Gallbladder Tissue Slide (Normal)
12-401-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Gallbladder Tissue Slide (Normal)
12-401-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Gallbladder Tissue Slide (Benign)
12-403-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Gallbladder Tissue Slide (Benign)
12-403-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Gallbladder Tissue Slide (Abnormal)
12-417-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Gallbladder Tissue Slide (Abnormal)
12-417-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Bladder Tissue Slide (Normal)
12-601-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Bladder Tissue Slide (Normal)
12-601-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Skin Tissue Slide (Normal)
12-701-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Skin Tissue Slide (Normal)
12-701-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Skin Tissue Slide (Benign)
12-702-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Skin Tissue Slide (Benign)
12-702-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Skin Tissue Slide (Abnormal)
12-706-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Skin Tissue Slide (Abnormal)
12-706-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Cartilage Tissue Slide (Benign)
12-903-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Cartilage Tissue Slide (Benign)
12-903-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Bone Tissue Slide (Chondrosarcoma)
12-907-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Bone Tissue Slide (Chondrosarcoma)
12-907-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
Uvula Tissue Slide (Benign)
12-908-10um	ProSci	10 um	241.8 EUR
Uvula Tissue Slide (Benign)
12-908-4um	ProSci	4 um	216.6 EUR
TEK Rabbit pAb
A7222-100ul	Abclonal	100 ul	369.6 EUR
TEK Rabbit pAb
A7222-200ul	Abclonal	200 ul	550.8 EUR
TEK Rabbit pAb
A7222-20ul	Abclonal	20 ul	219.6 EUR
TEK Rabbit pAb
A7222-50ul	Abclonal	50 ul	267.6 EUR
TEK Conjugated Antibody
C37274	SAB	100ul	476.4 EUR
TEK Rabbit pAb
A0743-100ul	Abclonal	100 ul	369.6 EUR
TEK Rabbit pAb
A0743-200ul	Abclonal	200 ul	550.8 EUR
TEK Rabbit pAb
A0743-20ul	Abclonal	20 ul	219.6 EUR
TEK Rabbit pAb
A0743-50ul	Abclonal	50 ul	267.6 EUR
Anti-TEK antibody
STJ25807	St John's Laboratory	100 µl	332.4 EUR
Anti-TEK antibody
STJ29302	St John's Laboratory	100 µl	332.4 EUR
Anti-TEK Antibody
STJ503257	St John's Laboratory	100 µg	571.2 EUR
Anti-TEK Antibody
STJ503258	St John's Laboratory	100 µg	571.2 EUR

W związku z tym niniejszy przegląd stanowi zintegrowaną próbę przedstawienia ujednoliconego poglądu na to, w jaki sposób komórki zapalne i odpornościowe dostarczają wskazówek komórkom macierzystym do rzeźbienia tkanek podczas rozwoju, starzenia się organizmu i kryzysu tkankowego w oparciu o aktualną wiedzę w tej dziedzinie.