Bisfosfoniany są szeroko stosowane jako środki przeciwresorpcyjne do leczenia różnych chorób kości i stawów, w tym zaawansowanej osteoporozy, szpiczaka mnogiego, nowotworów z przerzutami do kości, choroby Pageta kości i reumatoidalnego zapalenia stawów. Bisfosfoniany działają jako antyosteoklasty poprzez indukcję apoptozy osteoklastów, co powoduje zmniejszenie tempa resorpcji kości. Niestety, istnieje wiele dowodów na to, że długotrwałe stosowanie bisfosfonianów wiąże się z martwicą kości.

Patogeneza martwicy kości obejmuje śmierć osteoblastów, osteoklastów i osteocytów. Ponadto funkcje komórek śródbłonka, komórek nabłonkowych i fibroblastów są upośledzone w martwicy kości, co prowadzi do zaburzającej angiogenezy i opóźnionego gojenia się ran. Martwica kości jest najczęściej stwierdzana w kości szczęki, a określenie związanej z lekami martwicy kości szczęki (MRONJ) stało się stanem o największym znaczeniu klinicznym wśród pacjentów otrzymujących bisfosfoniany. Chociaż leczenie chirurgiczne jest skuteczną strategią leczenia MRONJ, zbadano również kilka niechirurgicznych interwencji mających na celu osłabienie MRONJ.

Mając na celu pogłębienie wiedzy na temat MRONJ, postanowiliśmy podsumować i omówić holistyczny wpływ bisfosfonianów na kość i otaczające ją tkanki.

Ponadto omówiono i omówiono niechirurgiczne interwencje mające na celu osłabienie martwicy kości wywołanej bisfosfonianami.

• Jednym z powikłań endoskopowego rozwarstwienia podśluzówkowego przełyku (ESD) jest pooperacyjne tworzenie się zwężenia. Powstawanie zwężenia jest związane ze stanem zapalnym i zwłóknieniem w procesie gojenia.
• Postawiliśmy hipotezę, że stopień uszkodzeń termicznych spowodowanych przez urządzenie jest związany z powstawaniem zwężeń.
• Naszym celem było ujawnienie związku między uszkodzeniem termicznym a wartością nastawczą urządzenia. Po resekcji przełyku świńskiego podaliśmy energię za pomocą urządzenia ESD (Flush Knife 1.5). Wykonaliśmy 10 punktów zasilania przez 1 s, 3 s i 5 s przy czterech nastawach urządzenia.
• Zmierzyliśmy ilość prądu płynącego do przewodzących punktów oraz temperaturę i oceniliśmy patologicznie skutki uszkodzeń termicznych. W rezultacie średnie najwyższe temperatury przez 1 s to I (SWIFT Efekt3, Wat20): 61,19°C, II (SWIFT Efekt3, Wat30): 77,28 °C, III (SWIFT Efekt4 Wat20): 94,50 °C i IV (SWIFT Efekt4 Wat30) ): 94,29°C.
• Średnie pola denaturacji cieplnej wynosiły I: 0,84 mm ² , II: 1,00 mm ² , III: 1,91 mm ² , IV: 1,54 mm ² . Średnia najwyższa temperatura i średnia powierzchnia denaturacji cieplnej były istotnie skorelowane (P < 0,001). Podsumowując, niskoprądowe wyładowania elektrostatyczne mogą tłumić rzeczywistą temperaturę i uszkodzenia termiczne w ranie ESD.
• Sarkoidoza jest wieloukładową, zapalną chorobą ziarniniakową, która rzadko obejmuje tkankę piersi. Patofizjologia tej przewlekłej choroby ziarniniakowej nie jest dobrze poznana, ale uważa się, że jest wieloczynnikowa, obejmująca wpływy środowiskowe powodujące wzmocnioną odpowiedź immunologiczną.
• Kluczową cechą histomorfologiczną w sarkoidozie jest obecność niemartwiczych ziarniniaków. W tym przypadku opisujemy 41-letniego Afroamerykanina ze znaną historią sarkoidozy płuc, u którego wystąpiła ginekomastia i obustronna tkliwość piersi z wyczuwalnymi guzkami.
• W dalszej biopsji i badaniu mikroskopowym guzków piersi stwierdzono rozlane zajęcie ziarniniaków niemartwiczych w obu piersiach. Ostateczną diagnozę rozległej sarkoidozy obejmującej tkankę piersi postawiono po wykluczeniu innych przyczyn ziarniniaków niemartwiczych.
• Pacjentka przeszła obustronną mastektomię w celu usunięcia guzków piersi. Ten przypadek omawia sarkoidozę z nietypowym miejscem. Enteroidy pochodzące z ludzkiej tkanki jelitowej (HIE; zwane również organoidami) są potężnym modelem ex vivo do badań żołądkowo-jelitowych.

Modyfikacja genetyczna tych nieprzekształconych kultur umożliwia nowy wgląd w funkcje genów i procesy biologiczne związane z chorobami jelit, a także funkcje specyficzne dla przewodu pokarmowego i segmentu dawcy.

W tym miejscu przedstawiamy szczegółowy rurociąg techniczny i protokół wykorzystania systemu edycji genomu CRISPR-Cas9 do wyłączenia interesującego genu w szczególności w HIE poprzez transdukcję lentiwirusową i klonowanie pojedynczych komórek. Protokół ten różni się od wcześniej opublikowanej alternatywy wykorzystującej elektroporację ludzkich kolonioidów do dostarczania transpozonów typu „piggyback” lub konstruktów CRISPR-Cas9, ponieważ protokół ten wykorzystuje zmodyfikowany, zfuzowany mały kierujący RNA LentiCRISPRv2 do ekspresji Cas9 i małego kierującego RNA w lentiwirusie.

 

Protokół obejmuje również etapy dostarczania genów i późniejsze klonowanie pojedynczych komórek komórek z nokautem, jak również weryfikację klonów i identyfikację sekwencji miejsc mutacji w celu ustanowienia klonów z nokautem.Przedstawiono ogólny schemat blokowy, wskazówki krok po kroku i sugestie dotyczące rozwiązywania problemów, aby pomóc badaczowi w uzyskaniu genetycznej linii HIE z nokautem w ciągu 2-3 miesięcy. W tym protokole dalej opisujemy, jak stosować HIE jako model ex vivo do oceny czynników restrykcyjnych gospodarza dla replikacji wirusa (na przykładzie replikacji ludzkiego norowirusa) przez nokautowanie czynników przyłączania gospodarza lub genów odporności wrodzonej. Omówiono inne zastosowania w celu poszerzenia użyteczności tego systemu, na przykład do generowania linii typu knockin lub warunkowego knockout HIE w celu zbadania funkcji niezbędnych genów w wielu procesach biologicznych, w tym w innych typach organoidów.

Inżynieria tkankowa in situ (TE) to podejście, które wykorzystuje bioresorbowalne przeszczepy w celu wywołania endogennej regeneracji uszkodzonych naczyń krwionośnych. Ocena nowo opracowanych przeszczepów naczyniowych TE in situ w dużej mierze opiera się na doświadczeniach na zwierzętach. Nie zdefiniowano jednak żadnego standardu dla modeli in vivo ani projektu badania, co utrudnia porównania między badaniami i wydajność translacji.

Aby dostarczyć danych wejściowych do sformułowania takiego standardu, celem tego badania było zmapowanie wszystkich doświadczeń na zwierzętach pod kątem TE naczyniowych in situ przy użyciu dostępnych z półki, resorbowalnych syntetycznych przeszczepów naczyniowych. Przeszukanie literatury (PubMed, Embase) dało 15 896 badań, z których 182 badania spełniały kryteria włączenia (n = 5101 zwierząt). Raporty przedstawiały szeroką gamę projektów badań, modeli zwierzęcych i biomateriałów. Metaanaliza drożności przeszczepu z analizą podgrup pod kątem gatunku, wieku, płci, miejsca implantacji i czasu obserwacji wykazała różnice specyficzne dla modelu. Badanie to identyfikuje możliwości ulepszonego projektowania i raportowania doświadczeń na zwierzętach w celu zwiększenia wartości translacyjnej.

Wpływ układu odpornościowego i stanu zapalnego na homeostazę narządów i nisze komórek macierzystych tkanek przy braku inwazji patogenów od dawna stanowi zagadkę w dziedzinie medycyny regeneracyjnej.

Paradoksalna rola składników immunologicznych w promowaniu uszkodzenia tkanek, a także rozwiązywaniu uszkodzeń tkanek, komplikuje terapeutyczne ukierunkowanie zapalenia jako środka do osiągnięcia homeostazy tkanek w kontekście choroby zwyrodnieniowej. Problem ten można rozwiązać za pomocą zintegrowanej, złożonej oceny zależności między komponentami zapalnymi a czynnikami mikro- i makrośrodowiskowymi występującymi w tkankach podczas zdrowia i choroby.

Rozważne decyzje dotyczące losu komórek macierzystych i ich zróżnicowanego potomstwa mają kluczowe znaczenie dla zachowania integralności i funkcji tkanek. Komórki macierzyste muszą dokonać tego wyboru losu w porozumieniu z innymi składnikami tkanki. Pod tym względem tkankowe komponenty odpornościowe, cząsteczki wykrywające niebezpieczeństwo/uszkodzenie kierujące sterylnymi kaskadami sygnalizacji zapalnej i komórki barierowe pełniące funkcje nadzoru immunologicznego odgrywają kluczową rolę w nadzorowaniu decyzji komórek macierzystych w ich niszach. Komórki macierzyste uczą się na podstawie wcześniejszych uszkodzeń, zarówno endogennych, jak i egzogennych, albo dostosowują się do trwałych zmian mikrośrodowiskowych, aby koordynować swoje decyzje.

Zatem zrozumienie sieci komunikacyjnych między komórkami macierzystymi a elementami układu odpornościowego jest niezbędne do zrozumienia decyzji podejmowanych przez komórki macierzyste w endogennych niszach tkankowych. Ponadto interakcje ogólnoustrojowe między niszami tkankowymi zintegrowanymi przez sieci odpornościowe służą jako systemy patrolujące do ustanawiania połączeń komunikacyjnych i organizowania ekologii mikroimmunologicznych w celu lepszej odpowiedzi organizmu na urazy i promowania regeneracji. Zrozumienie tych połączeń komunikacyjnych jest kluczem do opracowania immunocentrycznych terapii regeneracyjnych.

Gastroscope biopsy (ESD) tissue array
ST245	TissueArray	each	114 EUR
Whatman Lens Tissue 300x200mm
CLE9002	Scientific Laboratory Supplies	PK100	58.8 EUR
Whatman Lens Tissue 460x570mm
CLE9004	Scientific Laboratory Supplies	PK500	499.2 EUR
Whatman Lens Cleaning Tissue 100x150mm
CLE9000	Scientific Laboratory Supplies	PK625	170.4 EUR
BD Primaria 100x20mm Easy Grip Tissue Culture Dish
353803	Scientific Laboratory Supplies	PK200	415.2 EUR
Cryobox for biopsy vial
DD64052	Scientific Laboratory Supplies	PK12	186 EUR
Divider for cryobox 136x136x50mm 81 cryotubes 2 mL height 50 mm
DD39823	Scientific Laboratory Supplies	EACH	4.8 EUR
Filtration Tissue Nylon NITEX mesh opening 48um 102x100 cms
DD074011	Scientific Laboratory Supplies	EA	219.6 EUR
EZ-LINE Cell culture Dishes Tissue culture treated, 60X15mm, 500 per case
SP31171	Bio Basic	1CS, 500UNIT	230.89 EUR
EZ-LINE Cell culture Dishes Tissue culture treated, 90x20mm, 200 per case
SP31212	Bio Basic	1CS, 200UNIT	162.61 EUR
Clear PP cryobox with no divider 130x44x130mm
ARG1692	Scientific Laboratory Supplies	PK5	112.8 EUR
Cardboard cryobox 133x133x50mm white colour for 81 cryotubes 2mL
DD39542	Scientific Laboratory Supplies	EACH	8.64 EUR
Cardboard cryobox 133x133x75mm white colour for 81 cryotubes 4mL
DD39547	Scientific Laboratory Supplies	EACH	9.6 EUR
Biopsy Coredish 12 Compartmen Empty
CON8150	Scientific Laboratory Supplies	PK10	106.8 EUR
Rectangular Boiling Bath 425x321x90mm 12 Place
BAT1026	Scientific Laboratory Supplies	EACH	885.6 EUR
EZ-LINE Cell culture Dishes Tissue culture treated, 35X10mm, PS, Sterile TC treated, 500 per case
SP31146	Bio Basic	1CS, 500UNIT	208.27 EUR
81-Place PP Storage Boxes 12 x127x44mm Blue
ARG1700	Scientific Laboratory Supplies	PK5	138 EUR
SLS Lens Tissues 80 x100mm
SLS9500	Scientific Laboratory Supplies	PK50	7.2 EUR
81-Place PP Storage Boxes 12 x127x44mm Green
ARG1694	Scientific Laboratory Supplies	PK5	138 EUR
81-Place PP Storage Boxes 12 x127x44mm Purple
ARG1702	Scientific Laboratory Supplies	PK5	139.2 EUR
81-Place PP Storage Boxes 12 x127x44mm Orange
ARG1704	Scientific Laboratory Supplies	PK5	139.2 EUR
81-Place PP Storage Boxes 12 x127x44mm Natural
ARG1696	Scientific Laboratory Supplies	PK5	139.2 EUR
Tissue-Tek
abx082403-118ml	Abbexa	118 ml	276 EUR
Biopsy Coredish Lower GI Tract 12 Compartment Empty
CON8152	Scientific Laboratory Supplies	PK10	106.8 EUR
Biohazard Carton 305x305x685mm
SAF7674	Scientific Laboratory Supplies	PK6	366 EUR
Biohazard Carton 196x196x244mm
SAF7676	Scientific Laboratory Supplies	PK6	231.6 EUR
Premium Facial Tissues 18x21cm
CLE2432	Scientific Laboratory Supplies	PK36	171.03 EUR
Laser Cryo Labels 24x12.5mm
CRY8512	Scientific Laboratory Supplies	PK2380	168 EUR
Aluminum Cryobox 133x133mm for 2 vials
ARG1016	Scientific Laboratory Supplies	EACH	39.82 EUR
Aluminum Cryobox 133x133mm xfor 3 vials
ARG1018	Scientific Laboratory Supplies	EACH	43.87 EUR
Cardboard cryobox 133x133mm blue colour for 81 cryotubes 2 mL no dividers
DD39545	Scientific Laboratory Supplies	EACH	9.6 EUR
Stainless Steel Cryobox 133x133mm for 2 vials
ARG1766	Scientific Laboratory Supplies	EACH	39.82 EUR
Stainless Steel Cryobox 133x133mm for 3 vials
ARG1768	Scientific Laboratory Supplies	EACH	49.35 EUR
Bag heat seal 380x610x125mm
AUT1454	Scientific Laboratory Supplies	PK250	260.4 EUR
Nalgene 25x50mm Cryo Labels
CRY8328	Scientific Laboratory Supplies	PK200	70.8 EUR
PPE lockers 1800x300x300mm 1 tier
COV1024	Scientific Laboratory Supplies	EACH	198 EUR
PPE lockers 1800x300x300mm 2 tier
COV1026	Scientific Laboratory Supplies	EACH	247.2 EUR
PPE lockers 1800x300x300mm 3 tier
COV1028	Scientific Laboratory Supplies	EACH	283.2 EUR
PPE lockers 1800x300x300mm 4 tier
COV1032	Scientific Laboratory Supplies	EACH	301.2 EUR
PPE lockers 1800x300x300mm 6 tier
COV1034	Scientific Laboratory Supplies	EACH	376.8 EUR
PPE lockers 1800x300x450mm 1 tier
COV1036	Scientific Laboratory Supplies	EACH	226.8 EUR
PPE lockers 1800x300x450mm 2 tier
COV1038	Scientific Laboratory Supplies	EACH	272.4 EUR
PPE lockers 1800x300x450mm 3 tier
COV1056	Scientific Laboratory Supplies	EACH	308.4 EUR
PPE lockers 1800x300x450mm 4 tier
COV1058	Scientific Laboratory Supplies	EACH	315.6 EUR
PPE lockers 1800x300x450mm 6 tier
COV1062	Scientific Laboratory Supplies	EACH	403.2 EUR
Staining Jar W Lid 115x115x77mm
MIC6016	Scientific Laboratory Supplies	PK10	428.4 EUR
Brush Beaker 70x150x400mm
BRU1000	Scientific Laboratory Supplies	PK10	64.8 EUR
Basket PP 390x290x110mm Heavy Duty
BAS5100	Scientific Laboratory Supplies	EACH	27.24 EUR
Laser Cryo Labels 38x19mm White
CRY8514	Scientific Laboratory Supplies	PK1200	170.4 EUR
Box Poly Airtight 100X100X65mm
B59400	Scientific Laboratory Supplies	EACH	10.8 EUR
Box Poly Airtight 210X100X65mm
B59410	Scientific Laboratory Supplies	EACH	19.2 EUR
Box Poly Airtight 210X210X65mm
B59420	Scientific Laboratory Supplies	EACH	32.4 EUR
Box Poly Airtight 210X210X90mm
B59425	Scientific Laboratory Supplies	EACH	38.4 EUR
Hazards Cabinet 1800x1200x460mm
SAF8102	Scientific Laboratory Supplies	EACH	918 EUR
Rack, freezer, PP, 81x2ml, (130x130x45mm) Rainbow Pk
R1060	MTC Bio	5/pack	88.64 EUR
Glass Disposal Box 300x300x690mm
SAF7670	Scientific Laboratory Supplies	PK6	108.24 EUR
Hazards Cabinet 900x900x460mm
SAF8106	Scientific Laboratory Supplies	EACH	524.4 EUR
Hazards Cabinet 700x350x300mm
SAF8108	Scientific Laboratory Supplies	EACH	346.8 EUR
Hazards Cabinet 700x900x460mm
SAF8110	Scientific Laboratory Supplies	EA	478.8 EUR
Trolley 2xShelf 660x914x845mm
TRO1105	Scientific Laboratory Supplies	EACH	688.05 EUR
PC Freezer Box 100-Place 133x133x50mm
ARG1720	Scientific Laboratory Supplies	PK4	495.6 EUR
PC Freezer Box 81-Place 133x133x78mm
ARG1726	Scientific Laboratory Supplies	PK4	133.17 EUR
Tray with ribbed base PVC 200x250x60mm
TRA3002	Scientific Laboratory Supplies	EACH	30.12 EUR
Capsule No Lid 52x42x18mm 25ml
CX55218	Scientific Laboratory Supplies	EACH	50.4 EUR
Biopsy Coredish 5 Compartment Empty
CON8156	Scientific Laboratory Supplies	PK10	106.8 EUR
Biopsy Coredish 8 Compartment Empty
CON8160	Scientific Laboratory Supplies	PK10	106.8 EUR
Cuvette Rack 16 place 210x70x38mm
CEL1020	Scientific Laboratory Supplies	EACH	44.4 EUR
Brush Bottle Nylon 65x100x400mm
BRU1014	Scientific Laboratory Supplies	PK10	103.2 EUR
Brush Bottle Nylon 75x125x460mm
BRU1016	Scientific Laboratory Supplies	PK10	187.2 EUR
Hazardous Cabinet 1800x900x460mm
SAF8100	Scientific Laboratory Supplies	EACH	778.8 EUR
Dissecting Board PP 300x210x9mm
INS4107	Scientific Laboratory Supplies	EACH	48 EUR
AcidAlkali Cabinet 1800x1200x460mm
SAF8202	Scientific Laboratory Supplies	EACH	1416 EUR
Nalgene Jerrican 10L 191x229x368mm
BOT0272	Scientific Laboratory Supplies	EACH	92.4 EUR
Nalgene Jerrican 20L 229x305x445mm
BOT0273	Scientific Laboratory Supplies	EACH	134.4 EUR
Hazards Wall Cabinet 570x850x255mm
SAF8129	Scientific Laboratory Supplies	EACH	457.2 EUR
Tray Photographic 530x675x100mm
TRA3012	Scientific Laboratory Supplies	EACH	183.6 EUR
Tray Photographic 430x550x190mm
TRA3014	Scientific Laboratory Supplies	EACH	220.8 EUR
Tray Photographic 150x200x45mm
TRA3000	Scientific Laboratory Supplies	EACH	17.56 EUR
Tray Photographic 250x310x65mm
TRA3004	Scientific Laboratory Supplies	EACH	45.7 EUR
Tray Photographic 300x350x80mm
TRA3006	Scientific Laboratory Supplies	EACH	48.96 EUR
Tray Photographic 330x430x90mm
TRA3008	Scientific Laboratory Supplies	EACH	75.6 EUR
Tray Photographic 420x520x90mm
TRA3010	Scientific Laboratory Supplies	EACH	106.8 EUR
AcidAlkali Cabinet 1800x900x460mm
SAF8200	Scientific Laboratory Supplies	EACH	1185.6 EUR
AcidAlkali Cabinet 1040x900x460mm
SAF8212	Scientific Laboratory Supplies	EACH	1168.8 EUR
Brush Flask Bristle 50x100x380mm
BRU1060	Scientific Laboratory Supplies	PK5	90.06 EUR
Cryobabies label 33x13mm Green
CRY1000G	Scientific Laboratory Supplies	PK1000	73.2 EUR
Cryo Babies Labels 33x13mm Orange
IZ053519	Scientific Laboratory Supplies	PK1000	96 EUR
Hazards Floor Cabinet 900x460x460mm
SAF8104	Scientific Laboratory Supplies	EACH	411.6 EUR
AcidAlkali Cabinet 900x460x460mm
SAF8204	Scientific Laboratory Supplies	EACH	616.8 EUR
AcidAlkali Cabinet 900x900x460mm
SAF8206	Scientific Laboratory Supplies	EA	790.8 EUR
AcidAlkali Cabinet 700x350x300mm
SAF8208	Scientific Laboratory Supplies	EACH	514.8 EUR
AcidAlkali Cabinet 700x900x460mm
SAF8210	Scientific Laboratory Supplies	EACH	727.2 EUR
AcidAlkali Cabinet 840x900x460mm
SAF8214	Scientific Laboratory Supplies	EACH	1105.2 EUR
AcidAlkali Cabinet 850x570x255mm
SAF8216	Scientific Laboratory Supplies	EACH	688.8 EUR
Brush Bottle Nylon 45x65x300mm
BRU1010	Scientific Laboratory Supplies	PK10	94.8 EUR
Brush Bottle Nylon 50x75x350mm
BRU1012	Scientific Laboratory Supplies	PK10	68.4 EUR
Cardboard Freezer Box 133x133x76mm
ARG1660	Scientific Laboratory Supplies	EACH	10.8 EUR
Brush Cylinder Nylon 65x120x650mm
BRU1050	Scientific Laboratory Supplies	PK5	91.2 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette Pink
HIS0033	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	228 EUR
Simport Biopsy Embedding Cassette Blue
HIS0036	Scientific Laboratory Supplies	PK1500	210 EUR

W związku z tym niniejszy przegląd stanowi zintegrowaną próbę przedstawienia ujednoliconego poglądu na to, w jaki sposób komórki zapalne i odpornościowe dostarczają wskazówek komórkom macierzystym do rzeźbienia tkanek podczas rozwoju, starzenia się organizmu i kryzysu tkankowego w oparciu o aktualną wiedzę w tej dziedzinie.